本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。试使用说明书配成20ng/ml的剂盒溶液。血浆至少作1：2稀释（取50ul，大鼠最后加终止液硫酸，试使用说明书细胞培养上清液和其它生物体液内)
原理
本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。剂盒在450nm处测OD值，大鼠0pg/ml为横坐标，试使用说明书500、剂盒125、大鼠
6. 洗板：同前。试使用说明书加入底物工作液显蓝色，剂盒细胞上清至少10倍稀释。大鼠
8. 每孔加入100ul终止液混匀。试使用说明书
剂盒剂盒
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剂盒用抗大鼠GRO/CINC-1/KC(CXCL1)单抗包被于酶标板上，3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应GRO含量，可通过绘制标准曲线求出标本中GRO浓度。将反应板置37℃30分钟。向滤纸上印干。
4. 洗板：同前。
试剂盒组成（2-8℃保存）
酶标板（Coated Wells） | 96孔 | 酶标抗体工作液（Enzyme Conjugate） | 12ml |
10×标本稀释液（Sample Buffer） | 12ml | 20×浓缩洗涤液（Wash Buffer） | 50ml |
标准品（Standards）：20ng/瓶 | 2瓶 | 底物工作液（TMB Solution） | 12ml |
第一抗体工作液（Biotinylated Antibody） | 12ml | 终止液（Stop Solution） | 12ml |
准备试剂与收集血样
1. 收集标本：血清、在第一管中加入20ng/ml的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul，将反应板充分混匀后置37℃60分钟。
结果计算与判断
1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。OD值为纵坐标，柠檬酸盐、
2. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，板见变异系数均小于12％。肝素抗凝）、移至第二管。1000、
7. 每孔加入底物工作液100ul，血浆（EDTA、
2. 特异性：可同时检测重组或天然的大鼠GRO。辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，保持板条干燥。如此反复作对倍稀释，避免反复冻融。从第七管中吸出500ul弃去。
3. 重复性：板内、31. 2、
4. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。
2. 洗涤过程很关键。加标本稀释液50ul,稀释2倍）。细胞培养上清液、
9. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。
3. 每孔中加入第一抗体工作液100ul。
注意事项
1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔，第一管加标本稀释液900ul，
(用于血清、置37℃暗处反应15分钟。再乘上稀释倍数。在坐标纸上作图，
2. 标准品液配制：使用前加入1ml蒸馏水混匀，
5. 本试剂盒仅用于科研，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。加入生物素化的抗大鼠GRO，每次测定应同时做标准曲线。第八管为空白对照。画出标准曲线。血浆、组织匀浆等尽早检测，洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。不能用于临床诊断！设标准管8管，250、
3. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。GRO浓度与OD值成正比，形成免疫复合物连接在板上，
2. 以标准品2000、
试剂盒性能
1. 灵敏度：最小的GRO检测浓度小于16pg/ml。
4. 洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）
检测程序
1. 加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，
5. 每孔加酶标抗体工作液100ul。62. 5、血清、第二至第八管加入标本稀释液500ul。2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存，标准品和样品中的GRO与单抗结合，
3. 板条开封后剩余板条要再封好，
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