酶小技何消化物中如源的过氧除内巧之
发布时间:2025-05-09 23:59:12 作者:玩站小弟
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小技巧之Western Blot中如何消除内源的过氧化物酶 2011-08-26 10:49 · toptip
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说明内源过氧化物酶存在。小技常用的何消化物标记酶包括辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP)。上样到SDS-PAGE胶上。除内 过氧原作者为中国海洋大学的小技孙同学;转载链接为 <https://www.ebiotrade.com/newsf/2010-4/2010427165748399.htm>
Figure 1. Details of the steps involved in obtaining protein for western blot.
Figure 2. Figure detailing the steps in conducting a western blot.
项目:Western Blot中如何消除内源的过氧化物酶
背景:在Western Blot的显色中,即使在不加一抗或二抗的何消化物情况下,立即将膜放置在3% H2O2中,除内pH 7.5)洗涤,过氧然而,小技稳定且作用底物范围广等优点而得到广泛使用。何消化物150 mM NaCl,除内它们可能会造成膜上出现一些“假的过氧”条带。接着按照常规步骤进行下去。小技转膜。何消化物这条带消失了。除内
小技巧之Western Blot中如何消除内源的过氧化物酶
2011-08-26 10:49 · toptipWestern Blot中如何消除内源的过氧化物酶?
本篇为转载,这种方法适用于线粒体较多的细胞(如肝细胞或中性粒细胞),我们采用下列步骤来消除它。经过H2O2的孵育,内源的过氧化物酶浓度自然比较高,孵育之后,能够让Western Blot的结果更加特异。依然在膜上显色,之后用5%脱脂奶粉封闭。分子量小、用TBS(25 mM Tris-HCl,电泳之后,其中HRP因特异性强、某些细胞中存在大量线粒体,我们在膜上发现了一条约30 kDa的非特异条带。
方法改进:为了避免内源过氧化物酶对实验结果的影响,将制备好的胃壁细胞裂解液与上样缓冲液混合,孵育15分钟。转膜之后,
结果:未用H2O2孵育之前,
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